Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的更进一步中逐渐扩展

从第一次注意到肝巨噬细胞自身抗基底到注意到1M-癌症诊疗症状的成效不下在儿童后期就有很好的描述，多个肝巨噬细胞自身抗基底乙型肝炎的儿童中会有70%在血清转换后10年内中风癌症，而随访15年的儿童这一%增高到84%。相对之下，占到诊疗1M-癌症一半以上的M-1M-癌症的肺癌机制还没得到充分的分析。

越来越多的人开始采用有系统系统来界定1M-癌症的成效：个基底在注意到多种肝巨噬细胞自身抗基底时进到第1阶段，注意到血糖异常时进到第2阶段，注意到症状时进到第3阶段。一些多发肝巨噬细胞自身抗基底乙型肝炎的个基底，在1期和2期，成效快速，并发展为肺癌的1M-癌症。我们前描述了一都由在首次检测到多种肝巨噬细胞自身抗基底检验后大概10年无癌症的近乎快成效者，这都由病变人口数少，但特点比较明确。随后，我们辨认出肝巨噬细胞自身蛋白特异性CD8+T巨噬细胞中间体在成效减快的病变中会基本不不存在，但在近期肺癌和长期不存在的癌症病变中会很容易检测到。这似乎断定，与成效病变相对，这些病变免疫中间体的平衡增强。

晚期分析断定，尽管平衡性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但癌症病变不存在一些基本功能缺陷，其中会包含对IL-2的中间体能力减小。此外，癌症病变中会的畸变CD4+T巨噬细胞似乎对平衡比较具抵抗性，体现为畸变T巨噬细胞的减缓增强，自然激发的Treg和基底外激发的作用于Treg，以及蛋白经历的CD4+T巨噬细胞中会IL-2中间体增强。本分析的目的是描述了CD4+平衡性T巨噬细胞(Treg)在一小群近乎减快成效者中会的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX分析是一项以人群相结合的纵向分析，在21岁以下确诊的病变亲属中会检测1M-癌症的危险因素。我们前描述了长期减快成效者的特点，他们保持一致多重肝巨噬细胞自身抗基底乙型肝炎最少10年，但没注意到癌症的诊疗症状，快性或非展开性免疫。随后，10名暂时保持一致无癌症并愿意提供大量血浆检验的减快成效者纳入T和B巨噬细胞基本功能统计分析。在目前的分析中会，8名快成效者(SP都由)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的肝巨噬细胞自身抗基底乙型肝炎。所有的参与者都处于1M-癌症成效的1期，尽管一些人随后耗尽了肝巨噬细胞自身抗基底对某些蛋白的乙型肝炎中间体，然而，一名病变已经处于2期大概6年，但没注意到诊疗症状，一名病变被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集试验中检验时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中会对该供基底展开了单独审核分裂。转化外周血单个核分裂巨噬细胞(PBMCs)，选用多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞减缓试验中审核分裂供基底中会Treg的频不下、基因M-和基本功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、特别联和回归)展开无监督聚类统计分析，审核分裂Treg基因M-。

结果：与健康供基底相对，来自快成效基底的遗忘CD4+T巨噬细胞的监督聚类推测，触发着的遗忘CD4+ Treg频不下增高，与糖皮质激素作用于的TNFR特别蛋白(GITR)传达增高有关。一名HbA1c增高的病变与成效减快者和意味着的对照都由相对，Treg对光有所不同。基本功能统计分析断定，与健康供基底相对，来自减快成效基底的Treg内源性的CD4+畸变T巨噬细胞减缓值得注意损坏。体现为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134传达的减缓增高。

上图1 深入的基因M-统计分析推测，CD4+Treg亚M-在快成效函数调用中会增高。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有供基底的活着CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示出物传达鉴定出10个元簇:遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)采用9个不同Treg标示出降解的10个元簇的MST。每个路由表均是由一个协同(100个协同)，较小的元协同(10个元协同)在路由表都由区域内上色。每个路由表中会的年糕上图透露单个标示出的传达级别。(b)每个元聚类的热上图，以推测整基底标示出传达。(c, d)为HD都由(c)和SP都由(d)降解上图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起总质量为每个metacluster罐终点站上图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP都由:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T巨噬细胞(l)。橙色边框均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配大写字母秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 采用CITRUS的预测模M-证实，Treg频不下的增高是成效减快的标志。分级特别联(a - f)和大豆统计分析(g-k)比较SP参与者和意味着的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的均是由性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR传达展开转化，演示FlowSOM群基底。(b) HD(网纹)和SP(杂色)都由以及供基底SP 606(橙色)中会CD25+ cd127的频不下概要上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+特别联闭包的罐终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度填充，箭头突出的簇被比对为SP和HD函数调用间的不同。(j)罐终点站上图推测了在SP(杂色)和HD(灰点)都由中会，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的比起总质量(%)。(k)直方上图推测每个簇的基因M-(粉红色)和Treg标示出比起传达与历史背景传达(深蓝色);上列，闪存Treg_3;下面恰巧，闪存Treg_4。历史背景与所有其他簇中会标示出的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配大写字母秩检验

上图3 与健康献血者相对，成效减快者遗忘treg的GITR增高。每个遗忘CD4+T巨噬细胞元簇(遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热上图(sp606不包含在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR传达串联，推测直方上图(c)和概要上图(d)。Wilcoxon匹配大写字母秩和检验，p< 0.07(橙色)所有供基底包含，p< 0.05(深蓝色)供基底SP 606和意味着的HD不包含在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR传达，从分级特别联，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橙色)串联，推测直方上图(e)和概要上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配大写字母秩检验

上图4 来自减快成效的CD4+ treg巨噬细胞控制畸变CD4+T巨噬细胞的能力减小。SP都由用深蓝色的终点站和边框透露，HD都由用白色的终点站和边框透露，橙色的终点站/边框透露供基底sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(此番者)被标示出为CFSE, Treg按观察的%校准。用抗CD3 /28微珠活着化巨噬细胞，培育3同一天展开流式巨噬细胞术检测。(a-d)与CD4+此番者比起应的treg培育(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE减缓比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓比率。采用乙型肝炎对照(触发着的响应巨噬细胞仅有treg)量化减缓比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 畸变CD4+T巨噬细胞对减快成效的T巨噬细胞活着化的减缓比较脆弱。SP都由用深蓝色的终点站和边框透露，HD都由用白色的终点站和边框透露，橙色的终点站/边框透露供基底sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标示出，treg按观察的%校准。用抗CD3 /28微珠活着化巨噬细胞，培育3同一天展开流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因弟统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培育。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE减缓百分不下(b)。(c,d) CD25减缓百分不下(c)和CD134减缓百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中会的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

给出结论：我们给出的给出结论是，来自减快成效弟的活着化遗忘CD4+Treg在GITR传达中会得到了扩充和丰富，阐释了进一步分析Treg在1M-癌症似乎性个基底中会的异质性的必要性。

标题出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28